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2.ABCA1是GATA4-SASP信号主要的效应分子
接下来试图用体内的衰老模型来证实发现。首先，对人类OA软骨的转录图谱进行了GSEA。发现胆固醇平衡和mTORC1通路特征在人类OA进展过程中明显富集于不同表达的基因。此外，ABCA1的表达与几个SASP基因呈正相关，包括人类OA样本中的MMP13、IL1B和IL8，表明ABCA1在体内SASP调节中的潜在保守作用。
首先检查了胆固醇代谢和Abca1在原代小鼠软骨细胞中的作用，其衰老已被证明能促进OA的发展。使用以前建立的DNA损伤诱导的原代小鼠软骨细胞衰老模型，发现参与胆固醇流入和流出的基因，如Scarb1和Abca1，在软骨细胞衰老期间明显增加（图5a）。细胞胆固醇水平也是如此（图5a）。此外，通过短干扰RNAs（siRNAs）耗尽Abca1，部分抑制了SASP基因的表达，但没有抑制Cdkn2a在衰老的原代软骨细胞中的表达（图5b）。而在软骨细胞衰老过程中，用丙种球蛋白处理增强了SASP（图5c），用甘伯瑞或洛伐他汀处理则抑制了它（图5d）；胆固醇耗竭抑制了衰老软骨细胞中mTORC1活动的持续模式。因此，调控溶酶体胆固醇和SASP的Abca1途径在小鼠软骨细胞中是保守的。
为了研究Abca1调控的溶酶体胆固醇分配在体内衰老相关炎症中的作用，决定研究Abca1的药物调控是否会影响雄性小鼠内侧半月板（DMM）失稳引起的创伤后OA的进展60（图5e）。在DMM操作的雄性小鼠中，关节内注射propucol导致骨关节炎软骨损失和软骨下硬化的早期发生（图5f，g）。这些观察结果与SASP基因的表达增加相吻合，如Il6和Mmp13，以及公认的衰老标志物，如p16和核Hmgb1的表达分别增加和减少（图5h，i）。与这些OA表现相一致的是，用普鲁卡因治疗明显加重了DMM操作的雄性小鼠的OA相关的疼痛（图5j）。相比之下，用甘伯瑞治疗缓解了OA的进展，抑制了SASP的表达，并防止了软骨中p16和核Hmgb1表达的衰老相关变化（图5f-j）。这些数据表明，Abca1对胆固醇的溶酶体调节也可能是雄性小鼠OA期间衰老相关炎症和体内衰老的一个关键控制模块。文章的最后证实了ABCA1表征了人衰老中SASP的活性
